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A549细胞培养教程
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A549人非小细胞肺癌细胞系由D.J.Griad通过肺癌组织移植培养建系，患者为58岁白人男性。A549细胞能通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。 产品参数 01 A549细胞基本信息 A549人非小细胞肺癌细胞 名称：A549人非小细胞肺癌细胞 年龄：男，58岁 来源：肺 特性：贴壁生长 形态：上皮细胞样 支原体：无 推荐传代比例：1:2-1:3 推荐换液频率：2~3次/周 冻存液：无血清冻存液，液氮储存 规格：1x10^6cells/T25或1mL冻存管 倍增时间：~22 小时 保藏机构：ATCC 培养条件气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃ A549细胞培养基 90%DMEM+10%FBS+1%PS A549细胞STR鉴定 A549细胞STR鉴定报告图 到货处理 02 A549细胞收货处理 复苏细胞T25瓶 复苏A549细胞 1.收到A549细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生及时和我们联系； 2.用75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h，显微镜下观察细胞状态； 3.给收到的细胞拍照(10x,20x)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。 冻存细胞冻存管 冻存A549细胞 1.收到A549细胞后，若发现干冰已挥发干净，冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即拍照并与我们联系； 2.为保证细胞的高存活率，收到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏。 收货注意事项 1.如果使用培养瓶，在将其放入培养箱前，应将封口膜去掉，瓶盖旋松，以便进行充分的气体交换。 2.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。 培养指南 03 A549细胞培养操作说明 ►►► A549细胞复苏步骤 将含有1 mLA549人非小细胞肺癌细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）。 第二天换液并检查细胞密度。 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养 ►►► A549细胞传代操作 如果A549细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养 a.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有A549人非小细胞肺癌细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 c.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 ►►► A549细胞冻存步骤 待A549细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例 1.收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，然后进行细胞计数。 2.根据A549人非小细胞肺癌细胞数量对应加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×10^6~1×10^7/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 3.将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 ►►► 温馨小贴士 1.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 2.收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。 常见问题 1、何时须更换培养基 视细胞生长密度而定，常规细胞2-3天更换培养基。 2、何时进行传代 细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 首次传代建议1：2传代，就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。 3、细胞冻存浓度是多少 1*10^6-1*10^7之间都可以。 4、冻存细胞数量计算 如果是有要求每管要冻多少细胞，那就用1ml完培重悬后，取部分按平时方法计数，剩下的细胞按计数需要的细胞量冻存即可。 如果没要求，那就按平时，一个皿冻一管。 5、离心速率应为多少 细胞传代或冻存时欲回收细胞，其离心速度一般为800-1000 rpm/min，室温离心5-8分钟，转速过高，将造成细胞破裂死亡。 6、可否使用与原先不同培养基 不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，易造成细胞状态不好，最终造成细胞无法存活。 7、可否使用与原先不同血清种类 不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。  微信截图_20220519172131.png |
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