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小善缘225

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶活测定问题

想请教一下大家
测纯酶酶活问题
导入不同工程菌株中异源表达目的蛋白,再测定酶活时。两种做法哪种更合理可行呢?
1.测定比酶活时,先测定酶液的蛋白浓度,在将其稀释到同一水平,进行酶活测定。
2.测定比酶活时,直接向酶反应体系中加入相同体积的酶液,进行酶活测定。
计算比酶活时:酶活力(U/L)÷蛋白浓度( mg/L )
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

按理说都一样,一般是稀释成相同浓度。
保证测酶活时候,需要保证其他底物,cofactor或者下游一些偶联反应的酶都是大过量的。只有加入酶的量是限定的,所以如果按照方法2的话也得稍微估算一下,保证酶不要加太多。
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2024-02-24 09:23:35
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小善缘225

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2024-02-24 09:23:35
按理说都一样,一般是稀释成相同浓度。
保证测酶活时候,需要保证其他底物,cofactor或者下游一些偶联反应的酶都是大过量的。只有加入酶的量是限定的,所以如果按照方法2的话也得稍微估算一下,保证酶不要加太多。

那我现在一个蛋白浓度2000mg/L,一个1000mg/L。这差的太远,就需要先稀释,在测定酶活。
3楼2024-02-26 16:55:37
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